1、培养基的配制有哪些？

1.培养基

培养基的种类较多，常常是不同种的植物要求的培养基成分不同。根据培养植物，选用适宜的培养基。现将常用的几种培养基组成介绍给读者，供参考。

（1）MS培养基

（1）MS培养基

（2）White培养基

（2）White培养基

（3）Vacin and Went（VW）培养基

（3）Vacin and Went（VW）培养基

（4）Kundson C（KC）培养基

（4）Kundson C（KC）培养基

2.培养基母液的配制和保存

经常配制培养基，为减少工作量及便于低温贮藏，一般配成比所需浓度高10～100倍的母液，配制培养基时只要按比例量取即可。配好的母液需装在棕色小口瓶中，存放在0～4℃冰箱中可使用半年至1年。如发现有沉淀物则不可再用，需重新配制。MS培养基母液配制如下：

3.培养基的配制过程

将母液从冰箱中取出，依次排好，按需要定量吸取，放入量筒中。称取琼脂，加少量水后加热，并不断搅拌，直到全部溶化。再加入称好的糖和前面备好的各种成分，不断搅拌，使之充分混合。测定已配好的培养基氢离子浓度（酸碱度），用0.1～1.0摩尔/升（0.1～1.0摩）氢氧化钠和盐酸将培养基调至所需的浓度。

将配好的培养基分别灌注到培养瓶中（试管或三角瓶），用盖子（棉塞、橡胶塞、铝箔）将瓶盖好，外面再包一层牛皮纸，标明编号。

培养基通常用高压灭菌锅灭菌。气压111.46～121.59千帕（1.1～1.2千克/厘米2压力），10～20分钟。冷却备用。

2、配制培养基的步骤？

1、配制溶液

向容器内加入所需水量的一部分，按照培养基的配方，称取各种原料，依次加入使其溶解，最后补足所需水分。对蛋白胨、肉膏等物质，需加热溶解，加热过程所蒸发的水分，应在全部原料溶解后加水补足。

配制固体培养基时，先将上述已配好的液体培养基煮沸，再将称好的琼脂加入，继续加热至完全融化。并不断搅拌，以免琼脂糊底烧焦。

2、调节pH值\u2002

用pH试纸（或pH电位计、氢离子浓度比色计）测试培养基的pH值，如不符合需要，可用10%HCl或10%NaOH进行调节，直到调节到配方要求的pH值为止。

3、过滤

用滤纸、纱布或棉花趁热将已配好的培养基过滤。用纱布过滤时，最好折叠成六层，用滤纸过滤时，可将滤纸折叠成瓦棱形，铺在漏斗上过滤。

4、分装

已过滤的培养基应进行分装。如果要制作斜面培养基，须将培养基分装于试管中。如果要制作平板培养基或液体、半固体培养基，则须将培养基分装于锥形瓶内。

分装时，一手捏松弹簧夹，使培养基流出，另一只手握住几支试管或锥形瓶，依次接取培养基。分装时，注意不要使培养基粘附管口或瓶口，以免浸湿棉塞引起杂菌污染。

装入试管的培养基量，视试管和锥形瓶的大小及需要而定。一般制作斜面培养基时，每只15×150毫米的试管，约装3～4毫升（1/4～1/3试管高度），如制作深层培养基，每只20×220毫米的试管约装12～15毫升。每只锥形瓶装入的培养基，一般以其容积的一半为宜。

5、加棉塞\u2002

分装完毕后，需要用棉塞堵住管口或瓶口。堵棉塞的主要目的是过滤空气，避免污染。棉塞应采用普通新鲜、干燥的棉花制作，不要用脱脂棉，以免因脱脂棉吸水使棉塞无法使用。

制作棉塞时，要根据棉塞大小将棉花铺展成适当厚度，揪取手掌心大小一块，铺在左手拇指与食指圈成的圆孔中，用右手食指插入棉花中部，同时左手食指与姆指稍稍紧握，就会形成1个长棒形的棉塞。

棉塞作成后，应迅速塞入管口或瓶口中，棉塞应紧贴内壁不留缝隙，以防空气中微生物沿皱折侵入。棉塞不要过紧过松，塞好后，以手提棉塞、管、瓶不下落为合适。棉塞的2/3应在管内或瓶内，上端露出少许棉花便于拔取。塞好棉塞的试管和锥形瓶应盖上厚纸用绳捆札，准备灭菌。

6、制作斜面培养基和平板培养基

培养基灭菌后，如制作斜面培养基和平板培养基，须趁培养基未凝固时进行。

(1)制作斜面培养基。在实验台上放1支长0.5～1米左右的木条，厚度为1厘米左右。将试管头部枕在木条上，使管内培养基自然倾斜，凝固后即成斜面培养基。

(2)制作平板培养基。将刚刚灭过菌的盛有培养基的锥形瓶和培养皿放在实验台上，点燃酒精灯，右手托起锥形瓶瓶底，左手拔下棉塞，将瓶口在酒精灯上稍加灼烧，左手打开培养皿盖，右手迅速将培养基倒入培养皿中，每皿约倒入10毫升，以铺满皿底为度。

铺放培养基后放置15分钟左右，待培养基凝固后，再5个培养皿一叠，倒置过来，平放在恒温箱里，24小时后检查，如培养基未长杂菌，即可用来培养微生物。

来源：百度百科—培养基

3、培养基的配制

1.配料：

配方换算→在容器中加入少量水（蒸馏水，自然水）→按照配方称取各种药品（依次加入）→加足所需水量。

2.溶解：

淀粉溶解：少量冷水调成糊状。加热溶解，边加热边搅拌以防止烧焦。

3.调PH：

用1N的盐酸或1N的NaOH把培养基调节到所要求的值。

4.过滤：

滤纸或棉花进行过滤。

5.分装：

一般培养基放在三角瓶或试管中灭菌使用。

6.包扎：

分装好后，塞上棉塞，在用牛皮纸将棉塞包裹好，防止灭菌时水份进入把棉塞弄湿。

7.灭菌：

按配方上要求的温度、压力进行高压蒸汽灭菌。如果灭菌的温度太高，营养成分会被破坏。

8.贮存：

培养基在30℃下放置一天，无污染的即可使用。一般用牛皮纸包裹好存放于2-8℃冰箱中备用。

培养基在使用前通过高压或过滤灭菌。防止污染应该注意以下事项：

确认工作细胞库是否被污染，确认毒种工作种子批是否被污染，确认所用培养基及其添加成分是否被污染，均可用细菌、真菌及支原体无菌试验来确认并排除。

同时要对无菌试验培养基的灵敏度进行验证。实际生产中，可以从配制好的培养液中取少量加入营养琼脂于恒温培养箱内培养，48小时即可观察有无污染。

将有毒区与无毒区严格分开，并有各自独立的空气净化系统及孵室，有毒区对无毒区应保持相对负压，防止病毒对培养细胞(尤其是细胞库)的污染。

培养基-百度百科

4、培养基的配制是怎么样的？

1.培养基种类及成分

培养基根据其物理性状大致分成两类，即固体和液体培养基。在培养基中加入一定量的凝固剂（如琼脂、明胶等）即为固体培养基，而不加入凝固剂的即为液体培养基，具体运用上应视培养目的要求不同分别选择采用。

无论是固体还是液体培养基，其基本成分是类似的，一般可大致分为两个部分，即基本培养基如MS、B5、N6、Nitsh等和附加成分，如激素和天然附加物等，其基本成分如表1、表2。

表1 几种培养基主要成分表

表2 几种培养基附加成分表

2.培养基的配制

（1）母液的配制与保存 由于培养不同植物，需要配制不同的培养基。为了减少工作量，可先把药品配成母液（即浓缩液），一般扩大10～100倍，其中大量元素倍数略低，一般为10～20倍，微量元素和有机成分及铁盐等可扩大50～100倍。母液的配制及保存应注意以下几个方面：①药品称量应精确，尤其微量元素化合物应精确至0.0001克，大量元素化合物可精确至0.01克。②配制母液的浓度适当，倍数不宜过大，一是长时间保存后易沉淀，二是浓度大，用量就少，在配制培养基时易影响精确度。③母液贮藏也不宜过长，一般几个月左右，在配好的母液容器上应注明配制日期，以便定期检查，如出现浑浊、沉淀及霉菌等现象，就不能使用。④母液应在2～4℃的冰箱内保存。

（2）培养基的配制 首先要根据培养基配方，算好母液吸取量，并按顺序吸取，然后加入蔗糖溶液，并加入蒸馏水定容至所需体积，并用0.1～1摩尔/升的盐酸或氢氧化钠调整pH，加入琼脂加热溶化，配制好的培养基要趁热分注，倒入试管、三角瓶等培养器皿中，一般至容器1/4～1/5左右，最后加塞或封口准备消毒。

（3）培养基的消毒 由于培养基内有丰富营养物质，极利于细菌和真菌繁殖，造成污染，影响组培的成功，因此培养基消毒是必不可少的一个环节。一般采用高温高压消毒和过滤消毒两种方法。

高温高压消毒：一般用消毒锅消毒，把装有培养基的培养器皿先放入消毒篓中，再放入加有水的消毒锅内，注意容器不能装得过满，以免影响锅内蒸汽循环。装好后将锅盖拧紧，加热，并打开放气阀，待水煮沸后，放气3～5分钟排出锅内冷空气，即可关上放气阀并继续加热，使锅内保持108千帕压力、温度120℃左右，大约15～20分钟即可。

过滤消毒：一些易受高温破坏的培养基成分如引哚乙酸（IAA）、引哚丁酸（IBA）、玉米素（ZT）等，不宜用高温高压法消毒，则可用过滤消毒后加入至高温高压消毒的培养基中，过滤消毒可用细菌过滤消毒器，通过其中的0.45微米孔径的滤膜将直径较大的细菌等滤去，过滤消毒应在无菌室或超净工作台上进行，以避免污染培养基。

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